β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞通透性升高中的作用

作者：袁清红; 颜学滔; 郑菲; 王轶芃; 张宗泽; 陈凯; 王焱林; 詹佳

来源：中华麻醉学杂志, 2017, 37(07): 869-873.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-1416.2017.07.029

• 抑制蛋白类
• 胆碱能拮抗剂
• 内毒素类
• 肺
• 毛细血管通透性

目的评价β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞通透性升高中的作用。方法人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板(2ml/孔)或培养瓶(4ml/瓶)中,采用随机数字表法分为5组(n=15):空质粒转染组(C组)、LPS+空质粒转染组(LPS组)、盐酸戊乙奎醚+LPS+空质粒转染组(P+LPS组)、LPS+β-抑制蛋白-1 shRNA转染组(LPS+shRNA组)和盐酸戊乙奎醚+LPS+β-抑制蛋白-1 shRNA转染组(P+LPS+shRNA组)。LPS组和LPS+shRNA组分别以空质粒1.5μg或含15 nmol/Lβ-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞,孵育24 h时加入终浓度为0.1μg/ml的LPS孵育1 h;P+LPS组和P+LPS+shRNA组分别以空质粒1.5μg或含15 nmol/Lβ-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞,孵育24 h时加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,孵育1 h时加入终浓度为0.1μg/ml的LPS孵育1 h。采用Transwell法测定细胞通透性,采用免疫荧光化学法检测热休克蛋白27(HSP27)的表达水平,采用Western blot法检测β-抑制蛋白-1、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达水平,并计算p-p38MAPK/p38MAPK比值。结果与C组比较,LPS组、LPS+shRNA组和P+LPS+shRNA组细胞通透性升高,HSP27表达上调,pP38MAPK/P38MAPK比值升高,β-抑制蛋白-1表达下调(P<0.05),P+LPS组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,P+LPS组细胞通透性降低,HSP27表达下调,p-p38MAPK/p38MAPK比值降低,β-抑制蛋白-1表达上调,P+LPS+shRNA组p-p38MAPK/p38MAPK比值升高(P<0.05),其余指标差异无统计学意义(P>0.05);与P+LPS组比较,P+LPS+shRNA组细胞通透性升高,HSP27表达上调,P-P38MAPK/P38MAPK比值升高,β-抑制蛋白-1表达下调(P<0.05)。结论盐酸戊乙奎醚抑制LPS导致的人肺微血管内皮细胞通透性升高的机制完全与β-抑制蛋白-1有关。

• 单位
  武汉大学中南医院; 广东省深圳市宝安区妇幼保健院