基于重组PCR法构建人骨保护素N端的酵母表达载体

作者：李晓霞; 朱志峰; 王宝利; 戴芳; 郭刚; 张镜宇

来源：天津医药, 2006, 34(11): 753-755.

DOI：10.3969/j.issn.0253-9896.2006.11.001

• 破骨细胞
• 成骨细胞
• 聚合酶链反应
• 克隆,分子
• DNA,重组

目的:构建骨保护素(OPG)N端片段的酵母表达载体。方法:OPGN端D1-D4域仅由2个外显子编码。以人基因组DNA为模板,PCR分别扩增外显子2和外显子3,并使外显子2的3′引物和外显子3的5′引物具有相互重叠的一段序列。以2种PCR产物混合物为模板,采用重组PCR扩增OPGN端编码序列,拟插入酵母分泌型表达载体pPIC9K。为使未来分泌表达产物具有完全正确的N末端,再次采用重组PCR策略,将pPIC9K信号肽裂解位点前的一段序列(含单一限制酶位点BamHⅠ)与OPGN端编码序列拼接在一起,从BamHⅠ和EcoRⅠ位点插入pPIC9K。结果:得到了OPGN端酵母表达载体,测序证实插入序列正确。结论:重组载体的获得为基因工程研制具有生物活性的OPGN端片段奠定了基础。

• 单位
  天津医科大学; 天津医科大学代谢病医院