羊传染性脓疱病毒122蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体的制备

作者：周帅帅; 关继羽; 张竞; 周艳龙; 刘芳; 高宇; 赵魁^*; 高丰; 贺文琦

来源：中国兽医学报, 2020, 40(03): 541-546.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.03.16

• 羊传染性脓疱病毒
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 多克隆抗体

以提取的羊传染性脓疱病毒(ORFV)基因组为模版,PCR扩增ORFV122基因,并将该基因连接至原核表达载体pET-28a上,构建出pET-28a-122重组表达质粒。然后将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态,经IPTG诱导后成功表达出ORFV122蛋白。利用His标签可与镍离子结合的特性对ORFV122蛋白进行分离纯化。将纯化后的ORFV122蛋白免疫BALB/c小鼠,制备相应的多克隆抗体,并利用Western blot技术检测该抗体的特异性。免疫小鼠获得的抗ORFV122蛋白多克隆抗体经ELISA检测,其效价约为1∶80 000。此外,使用该抗体对ORFV122蛋白的表达规律进行了研究,发现ORFV122蛋白为早期表达蛋白。本试验获得的ORFV122蛋白多克隆抗体为以后ORFV122基因功能的后续研究奠定基础。

• 单位
  吉林大学