蓝舌病1型病毒VP2蛋白的原核表达及免疫反应性分析

作者：宋建领; 李华春

来源：中国畜牧兽医, 2017, 44(07): 2119-2125.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.07.030

• 蓝舌病
• VP2蛋白
• 表达
• 免疫反应性

试验旨在研究蓝舌病1型病毒(bluetongue virus serotype 1,BTV-1)VP2蛋白体外表达产物免疫反应性。根据已发表的BTV-1Y863毒株L2基因序列设计合成特异性BTV-1PCR引物,通过RT-PCR方法扩增L2基因,将纯化的L2基因克隆至pEASY-Blunt E1表达载体,对重组质粒进行鉴定,将阳性重组质粒L2克隆至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对获得的纯化的BTV-1 VP2重组蛋白进行Western blotting、ELISA、阻断ELISA分析。结果显示,BTV-1VP2蛋白在pEASY-Blunt E1载体上以包涵体形式表达,通过Ni-NTA亲和层析,160和200mmol/L咪唑是洗脱BTV-1VP2蛋白表达产物的最佳浓度。纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的BTV-1VP2重组蛋白,分子质量约105ku,Western blotting、ELISA、阻断ELISA结果显示,重组BTV-1VP2蛋白能与BTV-1型特异性抗体发生特异性结合,且此结合能被BTV-1阻断。本试验结果表明,通过原核表达载体pEASY-Blunt E1表达的BTV-1VP2重组蛋白具有良好的免疫反应性,为BTV-1VP2蛋白型特异性表位定位研究奠定了基础。