重组大肠杆菌产乙酰乳酸合成酶发酵条件优化

作者：赵婷; 黄礼清; 金**; 袁思棋^*; 刘君^*

来源：食品与发酵工业, 2020, 46(14): 156-162.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.023567

• 双乙酰
• 乙酰乳酸合成酶
• 大肠杆菌
• 响应面

为了提高来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的乙酰乳酸合成酶(acetolactate synthetase,ALS)的产酶水平,将含有目的基因的重组质粒p EGX-6p-1-als S,转化到E. coli BL21 (DE3)进行异源表达,并对重组als S的发酵条件进行优化。发酵结果显示,优化的发酵培养基成分包括葡萄糖12 g/L、蛋白胨10 g/L、柠檬酸钠5 g/L、KH2PO43 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L和Na Cl 2 g/L;在优化的培养基中,最佳诱导条件为诱导温度30℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度0. 4 mmol/L,诱导时间10 h。通过响应面预测发现,最佳产酶水平条件为p H 7. 0、温度30. 2℃,IPTG浓度为0. 42 mmol/L。经发酵试验验证,该条件下产酶水平达到242. 567 U/m L。基于以上所有优化条件,单位菌体(干重)产乙酰乳酸合成酶量达164. 299 k U/g,产酶水平达266. 657 U/m L,分别是LB培养基的1. 31和1. 77倍。

• 单位
  生物工程学院; 四川大学; 四川轻化工大学