中介素真核表达质粒的构建及其在大鼠近端肾小管上皮细胞中的表达

作者：周芸; 李荣山; 乔晞; 崔晓燕; 寇敏; 于桂花; 刘兴花; 李晓帆; 白波; 邵珊

来源：中国药物与临床, 2009, 9(05): 357-360+449.

• 质粒
• 转染
• 中介素 Plasmids
• Transfection
• Intermedin

目的构建带有绿色荧光蛋白的中介素(IMD)真核表达质粒pIRES2-EGFP/IMD,并转染大鼠近端肾小管上皮细胞系(NRK-52E)。方法合成带有IMD基因片段的pMD19-TSimple/IMD质粒,将pMD19-TSimple/IMD质粒和pIRES2-EGFP载体双酶切之后进行高效连接,将IMD亚克隆至pIRES2-EGFP上,对重组表达载体进行酶切、测序鉴定。采用FuGENEHD转染试剂转染NRK-52E细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白。提取细胞mRNA和蛋白,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测基因表达,Western检测IMD蛋白表达。结果经限制性酶切鉴定及测序分析证实...

• 单位
  山西医科大学第二医院