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摘要
Msn2作为C2H2型锌指结构转录激活因子，参与调控真菌生长速率、分生孢子发育及多种应激反应等生物学过程。本论文以产曲酸米曲霉3.042为出发菌株，构建pyrG营养缺陷型菌株，通过msn2基因的上下游序列为同源重组臂和回补pyrG基因为筛选标记，最终获得一株敲除msn2且回补pyrG基因的转化子g-5号菌株。较原始菌株米曲霉3.042相比，g-5菌株生长受到抑制且孢子生成量显著降低60%，在含10%及以上葡萄糖环境中不产孢，但可耐受30 mmol/LH_2O_2。g-5菌株摇瓶发酵曲酸产量达到21.55 g/L，较米曲霉3.042的11.86 g/L，提升了81%。经qRT-PCR分析，与米曲霉3.042相比，g-5菌株的msn2基因不表达；在发酵6 d时米曲霉调节曲酸合成相关基因kojR和LaeA基因表达量分别提高4.13倍和21倍；g-5菌株菌丝生长及产孢相关基因brlA与tps1表达量较3.042下调63倍和128倍，相反ageB基因表达量大幅上调59倍。
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单位天津科技大学; 生物工程学院; 工业发酵微生物教育部重点实验室
