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摘要
目的 探讨miR-27b-3p通过调控视神经萎缩蛋白1(OPA1)表达对心力衰竭模型心肌细胞线粒体融合的影响。方法 SD大鼠随机分成Sham组、model组、antagomir NC组和miR-27b-3p antagomir组，每组15只。结扎左冠状动脉前降支制备心力衰竭大鼠模型，造模成功的大鼠于尾静脉分别注射antagomir NC或miR-27b-3p antagomir。4周后，qRT-PCR检测miR-27b-3p和OPA1 mRNA水平；透射电镜观察心肌组织线粒体结构变化。采用0.8%的戊巴比妥钠对分离的大鼠心肌细胞进行诱导，并随机分成model组、inhibitor NC组、miR-27b-3p inhibitor组、miR-27b-3p inhibitor+siRNA NC组和miR-27b-3p inhibitor+OPA1 siRNA组，另取正常细胞作为Control组。qRT-PCR检测miR-27b-3p和OPA1 mRNA水平；双荧光素酶实验检测miR-27b-3p和OPA1的靶向关系；荧光素酶发光法检测线粒体ATP合成活力；DCFH-DA荧光染料检测线粒体活性氧(ROS)水平；JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位(ΔΨm);Western blot检测OPA1、线粒体融合蛋白(MFN)1、MFN2、电压依赖性阴离子通道1(VDAC-1)、细胞色素C氧化酶Ⅳ(COXⅣ)、线粒体转录因子A(Tfam)、过氧化物酶体增殖物激活受体Y辅激活因子1(PGC-1α)、自噬标志蛋白Beclin-1、B淋巴细胞瘤-2基因/腺病毒E1B相互作用蛋白3(Bnip3)表达。结果 与Sham组比较，model组大鼠心肌组织中miR-27b-3p表达明显增加(P<0.05),OPA1 mRNA明显减少(P<0.05),且线粒体结构受损，数量明显减少；miR-27b-3p antagomir下调miR-27b-3p表达后，OPA1 mRNA表达明显增加(P<0.05),线粒体结构明显恢复，数量也显著增多。细胞实验发现，与Control组相比，model组miR-27b-3p表达上调，OPA1 mRNA及OPA1、MFN1、MFN2、VDAC-1、COXIV、Tfam、PGC-1α蛋白表达下调，Beclin-1、Bnip3蛋白表达上调，线粒体ROS上升，ATP和ΔΨm下降(P<0.05);而miR-27b-3p inhibitor下调miR-27b-3p表达后，上述各项指标水平均得以逆转。miR-27b-3p靶向负调控OPA1蛋白表达。在抑制miR-27b-3p表达的基础上沉默OPA1可使戊巴比妥钠诱导的心肌细胞OPA1、MFN1、MFN2、VDAC-1、COXIV、Tfam、PGC-1α蛋白表达明显降低，Beclin-1、Bnip3蛋白表达明显升高，线粒体ROS明显上升，ATP和ΔΨm明显下降(P<0.05)。结论 miR-27b-3p在心力衰竭模型心肌组织中高表达，抑制miR-27b-3p通过靶向负调控OPA1蛋白表达促进心力衰竭模型心肌细胞线粒体融合。
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