miR-144-3p参与高蛋氨酸饮食诱导Cbs~(+/-)小鼠的肝细胞自噬

作者：盛思琪; 谢琳; 赵翔宇; 姜怡邓; 吴凯; 熊建团; 杨安宁; 郝银菊; 焦运^*

来源：中国组织工程研究, 2024, 28(08): 1289-1294.

• 微小RNA
• miR-144-3p
• 同型半胱氨酸
• 细胞自噬
• 肝损伤
• 高蛋氨酸饮食

背景：高蛋氨酸饮食可导致Cbs+/-小鼠发生肝损伤，高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA (miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程，具有重要意义。目的：探讨miR-144-3p在高蛋氨酸饮食诱导Cbs+/-小鼠肝细胞自噬中的关键作用。方法：(1)选取4周龄体质量相近的雄性胱硫醚β-合成酶基因正常(Cbs+/+)小鼠和单基因敲除(Cbs+/-)小鼠各10只，均饲以高蛋氨酸饮食，12周后处死，留取肝脏组织。(2)体外培养人源肝细胞(HL-7702)，分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)、同型半胱氨酸组(100μmol/L同型半胱氨酸)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、mimic-NC+同型半胱氨酸组(转染mimic-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p mimic组(转染miR-144-3p mimic)、miR-144-3p mimic+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p mimic+100μmol/L同型半胱氨酸)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、inhibitor-NC+同型半胱氨酸组(转染inhibitor-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p inhibitor组(转染miR-144-3p inhibitor)、miR-144-3p inhibitor+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p inhibitor+100μmol/L同型半胱氨酸)。采用荧光定量PCR检测肝组织和肝细胞中miR-144-3p的表达水平；转染miR-144-3p模拟物或抑制剂后，采用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-144-3p的转染效率及其对LC3B和p62蛋白表达的影响；酶联免疫法检测肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的表达情况；Pearson相关性分析肝细胞miR-144-3p表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶含量的相关性。结果与结论：(1)与Cbs+/+组比较，Cbs+/-组小鼠肝组织和同型半胱氨酸组肝细胞中miR-144-3p的表达水平降低(P <0.01)；(2)转染miR-144-3p模拟物后，与mimic-NC比较，miR-144-3p mimic组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平降低，p62蛋白的表达水平升高(P <0.01)；转染miR-144-3p inhibitor后，得到相反的结果(P <0.01)；(3)与mimic-NC组相比，miR-144-3p mimic组肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的含量降低(P <0.01)；与inhibitor-NC组比较，得到相反的结果(P <0.01)；(4)肝细胞中miR-144-3p的表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(P <0.01,r=-0.887 6)和门冬氨酸氨基转移酶(P <0.01,r=-0.829 9)的含量呈负相关；(5)结果表明，同型半胱氨酸通过抑制miR-144-3p的表达促进肝细胞的自噬，进而加重肝损伤。

• 单位
  宁夏医科大学; 基础医学院; 宁夏医科大学总医院