PEDV-RBD基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

作者：伊立超; 李乐天; 郝嘉翼; 时小双; 张爽; 高子函; 金宁一; 娄安钢^*; 李昌^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(09): 1710-1733.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.09.06

• 猪流行性腹泻病毒
• S蛋白
• 杆状病毒
• 受体结合域
• 蛋白表达

受体结合域是决定病毒侵入宿主及其嗜性的关键因素。该研究目的在于获得具有天然构象且反应原性良好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的受体结合域(receptor-binding domain, RBD)蛋白。根据PEDV S蛋白序列(GenBank登录号:AKN45969.1),设计、优化并合成其RBD部分基因序列,并将其亚克隆至杆状病毒双表达载体pFastBacTMDual上,得到了重组质粒pFBD-PER。将pFBD-PER转化到大肠杆菌DH10BacTM感受态细胞中,进行蓝白斑筛选,获得重组杆状质粒Bacmid-PER,通过脂质体转染至Sf9细胞中进行病毒拯救。转染120 h后,收取上清病毒液,盲传3代后收取Sf9细胞,利用间接免疫荧光法(IFA)及Western blot确定PEDV-RBD蛋白是否表达。结果显示,重组质粒pFBD-PER酶切验证正确,重组杆粒Bacmid-PER成功构建,杆状病毒能够表达PEDV-RBD蛋白,且能与strep tag抗体发生特异性反应。IFA鉴定出现特异性绿色荧光。结果表明,成功表达了PEDV-RBD蛋白且具有反应原性,为深入开展PEDV抗体制备、新型疫苗研发奠定基础。

• 单位
  延边大学; 中国医学科学院; 中国农业科学院