微囊藻毒素-LR超灵敏均相免疫分析方法的建立与优化

作者：张艺; 黄飚; 钮伟民; 赵灿培; 金坚

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2014, 28(03): 432-437.

• 微囊藻毒素
• 微囊藻毒素-LR
• 化学发光测定法
• 均相免疫分析

目的基于多克隆抗体免疫分析,构建并优化一种超灵敏、均相的光激化学发光法(AlphaLISA),用以检测水体中微囊藻毒素(MC)-LR含量。方法采用竞争原理,MC-LR人工抗原偶联的发光微球与标准品或样品MC-LR共同竞争限量一抗,再被二抗捕获,然后再通过生物素-亲和素与感光微球形成成免疫复合物,此时感光微球与发光微球发生接近,则产生并传递能量,发出特殊荧光。选择了合适的一抗和二抗工作稀释度,比较缓冲体系和反应时间的作用,从而优化了反应条件。结果通过优化反应条件,即筛选合适的一抗和二抗反应浓度、缓冲体系和反应时间,从而构建了MC-LR AlphaLISA检测法,其总反应时间40 min,灵敏度0.006μg·L-1,可测线性范围0.0065μg·L-1,变异系数小于10%,平均添加回收率107.7%,与MC-RR和MC-RY的交叉反应率分别为13.2%和0.91%。结论本研究方法灵敏度高,特异性好,免疫反应迅速,适用于多样本量水体的MC-LR检测。

• 单位
  无锡市疾病预防控制中心; 江南大学; 江苏省原子医学研究所