SRSF9基因敲除胶质母细胞瘤细胞株基因回补及其功能研究

作者：汪京京; 张真豪; 穆会君; 龚玲丽; 邹健; 殷莹^*

来源：安徽医科大学学报, 2021, 56(04): 550-555.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.04.009

• CRISPR/Cas9
• 同义突变
• 基因回补
• SRSF9
• 神经胶质瘤

目的在CRISPR/Cas9敲除SRSF9基因的胶质母细胞瘤U87单克隆株中进行SRSF9基因回补并进行回补功能研究。方法构建SRSF9-WT过表达载体并同义突变sgRNA1靶序列上的5个碱基构建SRSF9-sgMu过表达载体并包装成慢病毒,感染U87 SRSF9基因敲除单克隆细胞,构建SRSF9基因回补细胞株。利用Western blot和免疫荧光实验验证回补蛋白的定位,利用增殖和肿瘤干细胞成球实验验证回补基因的拯救功能。结果成功构建SRSF9-WT和SRSF9-sgMu过表达载体并包装成慢病毒。Western blot和免疫荧光实验验证回补成功,且回补的SRSF9蛋白优势表达于细胞核。增殖和肿瘤干细胞成球实验证明回补的SRSF9可以拯救其功能(P<0.05)。结论 SRSF9-sgMu成功在SRSF9基因敲除的U87单克隆细胞中回补SRSF9并拯救增殖和肿瘤干细胞成球功能。

• 单位
  南京医科大学; 无锡人民医院