细菌人工染色体携带的表达FGF18-绿色荧光蛋白重组体的构建

作者：孙德旭; 秦苏萍; 王晓天; 李小翠; 刘志强

来源：山东医药, 2013, (19): 11-14.

• FGF18
• 绿色荧光蛋白
• 细菌人工染色体
• 同源重组 fibroblast growth factor 18
• green fluorescent protein
• bacterial artificial chromosome
• homologous recombination

目的构建由细菌人工染色体(BAC)携带的表达FGF18-绿色荧光蛋白(GFP)的重组体,用于生产转基因小鼠,筛选表达FGF18的特定细胞。方法分别克隆FGF18基因启动子区域的5'同源臂和3'同源臂,插入到pBS-GFP-kan质粒的左右两段,构建携带FGF18同源臂的质粒。提取含有FGF18基因全长的bMQ-282D14 BAC,转化到SW105细菌中并筛选阳性克隆,之后再将带有FGF18基因同源臂的pBS-GFP-Kan质粒转化到该细菌内,在42℃实现基因同源重组,将GFP基因插入到FGF18基因的启动子区。结果经过氯霉素与卡那霉素的正负筛选,选出FGF18-GFP阳性的菌株,提取出构建好...

• 单位
  徐州医科大学