软骨终板细胞印度刺猬蛋白表达对软骨终板退变的意义

作者：**; 宋洁富^*; 王小健; 秦德安; 安奇君; 赵中涛; 梁庆元; 安雪军

来源：中华实验外科杂志, 2020, 37(11).

• 印度刺猬蛋白
• 软骨终板
• Modic退变
• 质粒转染

目的探讨细胞内印度刺猬蛋白(Ihh)表达水平变化对软骨终板细胞的影响与意义。方法 2018年5月至12月手术收集山西医科大学附属山西省人民医院骨科31例软骨终板(CEP)组织标本, 体外分离人CEP细胞培养至P3代, 随机分为过表达组、空载体组和敲减组, 分别添加Ihh信使RNA质粒、空载体和Ihh沉默RNA质粒, 质粒转染培养48 h后, 使用蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测标本Ihh及相关指标的蛋白和mRNA表达, 免疫荧光和原位杂交染色观测细胞表型。3组实验数据因方差不齐, 呈正态性分布, 选择Welch检验, Games-Howell法组间多重比较。结果质粒干预CEP软骨细胞Ihh水平表达, Westernblot结果显示过表达组、空载体组和敲减组3组细胞中Ihh(0.79±0.09, 0.31±0.20, 0.04±0.03)、Ⅱ型胶原(Col Ⅱ) (0.18±0.08, 0.49±0.14, 1.13±0.27)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)(0.78±0.17, 0.51±0.12, 0.37±0.06)灰度值差异有统计学意义(F=176.670、37.650、26.070, P<0.01)。RT-qPCR结果显示过表达组、空载体组和敲减组3组细胞中Ihh mRNA(3.13±1.21, 0.92±0.18, 0.39±0.22)、Col Ⅱ mRNA(0.66±0.13, 1.03±0.24, 1.64±1.32)和MMP-13 mRNA(9.17±2.35, 1.04±0.27, 3.56±0.26)相对表达水平差异有统计学意义(F=17.170、15.890、34.732, P<0.01)。免疫荧光和原位杂交结果显示与空载体组比较, Ihh和MMP-13在过表达组最强, 敲减组最弱, 而Col Ⅱ在敲减组中最强, 过表达组最弱。结论下调软骨细胞内Ihh表达可明显增加Col Ⅱ, 减少MMP-13, 维持细胞表型, 进一步延缓CEP软骨细胞退变。

• 单位
  山西医科大学