农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系

作者：周佳君; 胡恒康; 龚丽; 干安格; 喻卫武; 吴家胜; 黄坚钦; 张启香

来源：浙江农林大学学报, 2021, 1-9.

• 香榧
• 幼胚
• 农杆菌介导的遗传转化
• 羧苄青霉素
• 潮霉素

【目的】以香榧Torreya grandis ‘Merrillii’幼胚为受体材料，开展农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的遗传转化研究，揭示影响香榧遗传转化的关键因素，以建立农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系。【方法】以香榧种子突破种鳞后第8周至第11周的幼胚作为转基因受体材料，比较受体胚龄、农杆菌菌液浓度、侵染时间、抗生素质量浓度对遗传转化效率的影响，并采用潮霉素、绿色荧光蛋白GFP表达及GFP基因聚合酶链式反应对遗传转化香榧幼胚培养物进行阳性筛选。【结果】随着香榧幼胚胚龄的增加，抗逆性增强，污染率降低，成活率提高，第10周和第11周幼胚成活率分别为52.1%和52.3%。农杆菌菌液浓度和侵染时间均对香榧幼胚的污染率、成活率、愈伤组织诱导率以及体胚发生率具有显著影响（P<0.05）。菌液吸光度[D（600）]为0.5时，香榧幼胚愈伤组织诱导率和体胚发生率最高，分别为17.9%和17.3%；侵染时间为10 min时，愈伤组织诱导率和体胚发生率为最高，分别达到17.5%和17.1%。羧苄青霉素对于受体材料的农杆菌脱除具有显著影响（P<0.05），当羧苄青霉素质量浓度为300 mg·L-1时，成活率、愈伤组织诱导率和体胚发生率均最高，分别为60.5%、15.8%和17.5%。潮霉素对于香榧幼胚培养物的阳性筛选具有良好的效果，当潮霉素质量浓度为100 mg·L-1时，成活率为30.5%。【结论】不同胚龄香榧幼胚遗传转化效果不同，突破种鳞后第10周香榧幼胚遗传转化效果良好；当农杆菌菌液D（600）为0.5，侵染时间为10 min时，转化效果最佳；300 mg·L-1为羧苄青霉素脱除农杆菌的最佳质量浓度；100 mg·L-1是潮霉素阳性香榧幼胚筛选的最佳质量浓度。图3表5参37

• 单位
  浙江农林大学