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摘要
为了筛选不同产羔数辽宁绒山羊母羊各组织中稳定表达的内参基因，试验随机选取同期发情后的4岁产单羔和双羔母羊各3只，采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、下丘脑、垂体、子宫角、卵巢，取各器官部分组织提取总RNA,检测总RNA浓度和纯度后合成cDNA,设计U6、ACTβ、B2M、18S rRNA、GAPDH、RPLPO内参基因引物，检测各引物的特异性和扩增效率，采用实时荧光定量PCR方法检测6个常见内参基因在以上组织中的表达情况，通过geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFin-der软件综合筛选出稳定表达的内参基因，并用geNorm软件分析最佳内参基因个数。结果表明：提取到的总RNA浓度和纯度较高，设计的引物特异性和扩增效率(96.53%～107.23%)较好，各内参基因在不同产羔数辽宁绒山羊母羊全部组织中均大量表达，且表达水平存在差异，Ct值在8.18～17.61之间。经geNorm、NormFinder、BestKeeper软件筛选发现不同产羔数辽宁绒山羊母羊性腺轴组织和全部组织中最稳定的内参基因不同，可能是软件算法不同造成的；经geNorm软件分析，最佳内参基因个数均为2个。经RefFinder软件分析在下丘脑中最稳定的内参基因组合是RPLPO和B2M基因，垂体中最稳定的内参基因组合是RPLPO和U6基因，卵巢中最稳定的内参基因组合是RPLPO和GAPDH基因，子宫角中最稳定的内参基因组合是GAPDH和18S rRNA基因。说明在不同产羔数辽宁绒山羊母羊全部组织中及性腺轴下丘脑、垂体、卵巢、子宫角各组织中最稳定的内参基因的组合分别为是U6和RPLPO,RPLPO和B2M,RPLPO和U6,RPLPO和GAPDH,GAPDH和18S rRNA。
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单位动物科学学院; 山西农业大学
