RNA测序联合CRISPR/Cas9基因编辑技术鉴定调控维甲酸诱导分化功能的miRNA

作者：王凌燕; 林仁章; 江佩芳; 张雲; 李佳蒸; 陈钰雯; 胡建达^*

来源：中国实验血液学杂志, 2021, 29(02): 339-347.

DOI：10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2021.02.006

• CRISPR/Cas9
• microRNA
• 急性早幼粒细胞白血病
• 全反式维甲酸
• 髓系分化

目的:研究miRNA的敲除对全反式维甲酸(ATRA)介导的急性早幼粒细胞白血病髓系分化的影响,并鉴定下调的miRNA若干,设计合成针对miRNA前体基因序列的sgRNA,通过CRISPR/Cas9技术实现miRNA在编码基因水平上的敲除。实时荧光定量PCR验证miRNA水平的变化和流式细胞术检测miRNA敲除后对细胞分化水平的影55种成熟miRNA下调。应用CRISPR/Cas9进行基因敲除后,PCR及Surveyor assay检测可见明显的DNA剪切条带,后,细胞的髓系分化受到明显抑制,而敲除miR-155后髓系分化水平则有所上调。结论:应用CRISPR/Cas9可进行针对平的影响,其具体机制是通过对分化相关靶基因的综合调控。

• 单位
  福建医科大学附属协和医院