摘要
目的将构建的Fn14短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染胰腺癌PANC-1细胞并检测接种转染的癌细胞增殖情况,分析探讨肿瘤坏死因子相关弱诱导细胞凋亡/成纤维细胞生长因子诱导因子14(TNFrelated weak inducer of apoptosis/fibroblast growth Factor-inducible 14,TWEAK/Fn14)在胰腺癌细胞增殖过程中的作用。方法构建靶向Fn14基因的shRNA并转染胰腺癌PANC-1细胞来特异性沉默Fn14基因的表达。采用流式细胞术及免疫荧光法检测shRNA干扰序列对Fn14表达的影响;采用CCK-8法检测阻断TWEAK/Fn14信号通路后PANC-1肿瘤细胞增殖情况;采用Western blotting法检测阻断TWEAK/Fn14信号通路后下游因子核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、TWEAK及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达的影响来进一步探索该信号通路的作用机制。结果转染Fn14 shRNA 24 h后,PANC-1肿瘤细胞的吸光度值(A值)显著低于对照组(P<0.000 1);质粒转染后PANC-1细胞的NF-κB、TWEAK及caspase-3蛋白表达量也明显低于对照组(P<0.05);且抑制TWEAK/Fn14信号通路后PANC-1细胞的凋亡增加。结论 TWEAK/Fn14参与了胰腺癌的发生发展过程。TWEAK/Fn14可影响胰腺癌肿瘤细胞的凋亡。
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单位四川大学华西医院