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摘要
利用改良的CTAB法提取高质量的DNA,对菠菜AFLP反应体系中酶切与连接、预扩增、选择性扩增等关键试验条件进行优化,建立了适合菠菜AFLP分析的反应体系:酶切连接采用一步法,即模板DNA150 ng,EcoRⅠ/MseⅠ各0.25 U,37℃酶切5 h,16℃连接6 h;预扩增体系浓度dNTPs 0.2 mmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,预扩增产物稀释200倍作为选择性扩增体系模板。利用优化的反应体系,从256对E+ANN/M+ANN引物组合中,筛选出20对条带清晰、多态性丰富的引物组合,为菠菜群体的遗传多样性、种质鉴定等研究提供了理论基础。
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单位北京市农林科学院蔬菜研究中心; 农业部; 生命科学学院; 山西师范大学
