人源DNA聚合酶Pol δ小亚基p12的抗体制备及应用

作者：李骁; 刘留; 张磊; 周亚竟

来源：中国生物工程杂志, 2012, (05): 12-18.

DOI：10.13523/j.cb.20120503

• DNA聚合酶δ
• 小亚基p12
• 蛋白纯化
• 多克隆抗体
• PCNA DNA Polymerase δ Smallest subunit p12 Protein purification Polyclonal antibody PCNA

人源DNA聚合酶δ(Polδ)是由p125、p50、p68和p12四个亚基组成的异源四聚体,小亚基p12在Polδ参与DNA复制与损伤修复过程中起着至关重要的作用。为了获得具有高度特异性和灵敏性的抗p12抗体,利用PCR技术成功扩增p12基因,通过酶切、连接、转化等常规分子克隆方法构建重组原核表达质粒pGEX-5X-3-p12,经转化大肠杆菌BL21,诱导表达的可溶性融合蛋白经Glutathione Sepharose 4B柱和FPLC Mono Q柱纯化、Factor-Xa酶切,获得不带GST标签的p12蛋白作为抗原;免疫新西兰大白兔制备抗血清并用Protein A/G亲和层析柱纯化多克隆抗...

• 单位
  江苏大学