长链非编码RNA Neat1对紫外线B诱导人晶状体上皮细胞焦亡的抑制作用及其机制

作者：王敏; 王妍茜; 陈颖; 赵越越; 杨涛; 康刚劲^*

来源：中华实验眼科杂志, 2023, 41(06).

• 白内障
• 晶状体
• 上皮细胞
• 细胞焦亡
• 紫外线B
• LncRNA Neat1

目的研究长链非编码RNA核旁斑长点组装转录本1(Neat1)在紫外线B诱导人晶状体上皮细胞(LECs)焦亡中的作用及其机制。方法体外培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3, 将处于对数生长期的HLE-B3细胞分别采用紫外线B照射0、2、4和8 h;采用Western blot法检测照射不同时长后焦亡相关蛋白胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达, 采用实时荧光定量PCR法检测照射不同时长后细胞中Neat1 mRNA相对表达量, 采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力并以此筛选紫外线诱导LECs焦亡的最佳照射时长, 最终确定为4 h。另将HLE-B3细胞分为阴性siRNA转染组、siRNA Neat1转染组、阴性siRNA转染+照射组和siRNA Neat1转染+照射组, 采用相应试剂转染24 h, 其中阴性siRNA转染+照射组和siRNA Neat1转染+照射组转染相应试剂后采用紫外线B照射4 h。采用CCK-8法检测各组细胞活力, 流式细胞术检测细胞焦亡, Western blot法检测caspase-1、gasdermin D蛋白(GSDMD)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)表达, ELISA法检测白细胞介素(IL)-1β质量浓度, 透射电子显微镜下观察各组HLE-B3细胞超微结构变化。结果随照射时间的延长, caspase-1蛋白表达条带灰度呈递增趋势。照射0、2、4、8 h caspase-1蛋白相对表达量分别为0.05±0.01、0.25±0.07、0.51±0.04和0.74±0.02, 总体比较差异有统计学意义(F=168.223, P<0.001), 其中照射不同时长两两比较, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。Neat1 mRNA相对表达量随照射时间延长呈递增趋势, 细胞活力值呈递减趋势, 照射不同时长两两比较, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。与阴性siRNA转染组比较, siRNA Neat1转染组细胞活力值升高, 阴性siRNA转染+照射组细胞活力值降低, 差异均有统计学意义(均P<0.01);与阴性siRNA转染+照射组比较, siRNA Neat1转染+照射组细胞活力值升高, 差异有统计学意义(P<0.05)。阴性siRNA转染组和siRNA Neat1转染+照射组细胞焦亡率明显低于阴性siRNA转染+照射组, 差异均有统计学意义(均P<0.01)。阴性siRNA转染+照射组caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量均较阴性siRNA转染组和siRNA Neat1转染+照射组高, 差异均有统计学意义(均P<0.01)。阴性siRNA转染+照射组IL-1β质量浓度明显高于阴性siRNA转染组和siRNA Neat1转染+照射组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。透射电子显微镜下观察可见, 阴性siRNA转染+照射组和siRNA Neat1转染+照射组细胞肿胀, 细胞膜孔隙形成, 线粒体肿胀, 呈空泡状, 线粒体嵴模糊, 其中与阴性siRNA转染+照射组相比, siRNA Neat1转染+照射组细胞肿胀程度减轻, 细胞膜孔隙减少, 线粒体肿胀程度亦减轻。结论 Neat1通过caspase-1介导的焦亡经典途径参与紫外线B诱导的人LECs焦亡过程, 沉默Neat1可以抑制人LECs焦亡。

• 单位
  西南医科大学