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摘要
旨在通过慢病毒包装SV40-LT基因并转导PMSCs以构建鸡骨骼肌卫星细胞系。本研究采集20～30枚15胚龄健康AA鸡的胸部组织，采用混合酶消化法分离培养PMSCs。将细胞随机分为两组，每组3个重复，处理组选择SV40-LT慢病毒转染48 h后，更换含1μg·mL-1的嘌呤霉素筛选培养基于处理组和对照组(病毒不转染)。待对照组细胞全部死亡，对处理组细胞进行不断传代培养，最终获得鸡骨骼肌卫星细胞系。免疫荧光试验分析鸡骨骼肌卫星细胞标志基因PAX7的表达；采用CCK-8和细胞周期分析检测细胞增殖特性；血清依赖性和软琼脂分析检测其恶性转化情况；构建诱导分化模型检测其诱导分化能力。结果表明，PMSCs中有92%细胞PAX7基因呈阳性，可用于后续研究。SV40-LT基因在鸡骨骼肌卫星细胞系(IMSCs P12)中的表达是原代鸡骨骼肌卫星细胞的15倍，且连续传代至12代后，IMSCs P12与PMSCs均呈纤维样状。IMSCs P12具有更高的增殖活性且没有发生恶性转化，随后，对IMSCs P12进行诱导分化，在其增殖至70%到诱导分化1 d这一阶段，IMSCs P12与PMSCs的PAX7基因表达下调，而MyoD和MyHC基因表达上调。结果提示，本研究通过转染SV40-LT基因成功培养了鸡骨骼肌卫星细胞系，其具有与原代鸡骨骼肌卫星细胞相似的特性。该细胞系的建立为研究家禽骨骼肌相关的功能基因提供了新的平台，也为SV40-LT基因在家禽细胞永生化的研究奠定了基础。
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单位动物科技学院; 河南农业大学
