科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
Fas相关因子1(Fas-associated factor-1,FAF1)为Fas家族成员，含有数个多功能结构域，可参与细胞凋亡、炎症、坏死、细胞增殖和蛋白质稳态等生物学过程。本研究旨在制备牦牛FAF1多克隆抗体，探索FAF1在牦牛不同年龄睾丸组织及不同繁殖周期卵巢的生物学作用。试验扩增出牦牛FAF1基因全序列，构建牦牛pET28a-FAF1蛋白原核表达载体，优化诱导条件，通过Ni-NTA柱纯化后，免疫试验动物，获得兔源FAF1多克隆抗体。选取幼年(1、2周岁)、成年(3、4、6、7周岁)、老年(11周岁)三个年龄段雄性牦牛睾丸，选取不同繁殖周期(卵泡期、黄体期和妊娠期)雌性牦牛卵巢，采用实时荧光定量、Western blot、免疫组织化学(IHC)方法分别检测不同年龄雄性牦牛睾丸及不同繁殖周期雌性牦牛卵巢中FAF1 mRNA、蛋白相对表达量及蛋白的表达定位。结果表明，成功构建原核表达载体pET28a-FAF1,25℃、IPTG浓度为0.5 mmol·L-1诱导5 h为最优诱导条件，该重组蛋白主要存在于包涵体中，免疫试验动物后获得兔源FAF1多克隆抗体，抗体效价为1∶1 024 000,特异性良好。睾丸组织实时荧光定量结果显示，FAF1 mRNA在3、4、7周岁雄性牦牛睾丸组织中相对表达量显著高于其他年龄段；睾丸组织Western blot结果显示，FAF1蛋白在11周岁时相对蛋白表达量显著高于其他年龄段，6、7周岁次之，3、4周岁FAF1相对蛋白表达量最低；睾丸组织免疫组织化学结果显示，FAF1主要表达于精子、精子细胞、精原细胞、初级精母细胞、支持细胞、睾丸间质细胞和管周肌样细胞中。卵巢组织实时荧光定量结果显示，雌性牦牛黄体期卵巢FAF1 mRNA相对表达量显著高于卵泡期和妊娠期，妊娠期卵巢次之，卵泡期卵巢最低；卵巢Western blot结果显示，卵泡期和妊娠期卵巢FAF1蛋白相对表达量显著高于黄体期，卵泡期卵巢表达量最高，妊娠期卵巢次之，黄体期卵巢中表达量最低；卵巢IHC结果显示FAF1主要表达于卵巢生殖上皮细胞、颗粒细胞、卵丘细胞、卵泡膜细胞和黄体细胞。FAF1 mRNA和蛋白在不同年龄睾丸及不同繁殖周期卵巢组织存在显著差异化表达，综上推测，FAF1可能与雄性牦牛的睾丸发育、精子发生及睾酮分泌密切相关，与雌性牦牛的卵泡闭锁、发育、成熟和黄体溶解生理过程相关，本研究为更进一步探索FAF1在牦牛生殖生理功能方面提供依据。
- 单位
