人脐带间充质干细胞来源外泌体对兔自身免疫性干眼外周血巨噬细胞的调控

作者：李娜; 粘红; 赵璐; 韦燕凯; 吴怡媛; 魏瑞华^*

来源：中华实验眼科杂志, 2019, (11).

• 脐带间充质干细胞
• 外泌体
• 巨噬细胞
• 细胞因子
• 自身免疫性干眼

目的 探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体(hUC-MSC-exo)对兔自身免疫性干眼外周血单核巨噬细胞表型以及相关细胞因子表达的影响。方法 分离培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)并鉴定,使用超速离心法分离纯化外泌体,透射电子显微镜下观察外泌体形态和直径分布范围,Western blot法检测表面特异性蛋白。应用随机数字表法将6只实验兔随机分为正常对照组和干眼模型组,每组3只。干眼模型组建立兔自身免疫性干眼模型,造模后8周收集泪腺组织,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞相关基因mRNA的表达。在体外,将hUC-MSC-exo或者等容积的磷酸盐缓冲液(PBS)与经兔泪腺上皮细胞刺激后的干眼模型组外周血单个核细胞(PBMCs)共培养,实验分为PBS对照组和hUC-MSC-exo组,48 h后收集PBMCs,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞表型分子及相关细胞因子mRNA的表达。结果 hUC-MSCs具有MSCs的免疫表型和基本生物学特性。透射电子显微镜下观察可见hUC-MSC-exo为直径30～100 nm的膜性小囊泡,其可表达特异性蛋白CD9、CD63和CD81。干眼模型组泪腺组织中,M1型巨噬细胞表型分子一氧化氮合酶2(NOS2)mRNA以及炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA相对表达量分别为3.06±1.00、2.77±0.72和1.30±0.08,较正常对照组的1.00±0.03、1.01±0.02和1.01±0.01明显升高,M2型巨噬细胞表型分子精氨酸酶1(Arg1)、CD206 mRNA以及抗炎因子IL-10 mRNA相对表达量分别为0.55±0.07、0.60±0.13和0.65±0.14,较正常对照组的1.00±0.00、1.00±0.00和1.01±0.01明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在体外,hUC-MSC-exo组PBMCs中M1型巨噬细胞表型分子NOS2 mRNA以及炎性因子TNF-α、IL-1β mRNA相对表达量分别为0.59±0.08、0.56±0.07和0.47±0.04,较PBS对照组的0.98±0.03、1.03±0.11和1.00±0.08明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)；M2型巨噬细胞表型分子Arg1、CD206 mRNA以及抗炎因子TGF-β、IL-10、IL-4 mRNA相对表达量分别为2.13±0.28、1.32±0.03、1.53±0.20、1.47±0.08和1.51±0.16,较PBS对照组的1.10±0.17、1.01±0.06、1.05±0.10、0.98±0.03和1.01±0.03明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 hUC-MSC-exo可诱导兔自身免疫性干眼外周血单核巨噬细胞向抗炎性M2表型极化,抑制巨噬细胞相关炎性因子TNF-α、IL-1β分泌,同时升高抗炎因子IL-10和TGF-β表达,具有抑制炎症反应的潜能。

• 单位
  天津医科大学; 天津医科大学眼科医院