摘要

目的研究苦瓜蛋白(MD28)对Hep G2细胞载脂蛋白(a)[Apo(a)]表达的影响,探索其作用机制。方法离心、超滤、透析、阳离子交换色谱、反相高效液相色谱等方法提取苦瓜蛋白;MTT法检测苦瓜蛋白处理Hep G2细胞后细胞存活率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测Apo(a)、法尼酯X受体(FXR)、肝细胞核因子4α(HNF4α)的mRNA和蛋白表达水平;qRT-PCR检测hsa-miR-23b-3p的表达水平,采用小干扰RNA转染沉默FXR。结果与对照组相比,0.1、0.2、0.4、0.8及1.6 g/L苦瓜蛋白处理Hep G2细胞24 h,细胞存活率无统计学差异;与对照组相比,苦瓜蛋白呈剂量和时间依赖性抑制Apo(a)表达,以1.6 g/L苦瓜蛋白作用48 h的效果最为显著;苦瓜蛋白上调FXR和hsa-miR-23b-3p表达水平,下调HNF4α表达水平,沉默FXR则逆转苦瓜蛋白的上述作用,沉默hsa-miR-23b-3p能逆转苦瓜蛋白对HNF4α的下调作用,但对FXR的表达无影响。结论苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制Hep G2细胞Apo(a)的表达,有望成为临床降低脂蛋白(a)的候选药物。