贝莱斯芽孢杆菌角蛋白酶的克隆表达、纯化及酶学性质

作者：殷方荣; 翟李欣; 田乔鹏; 管政兵; 蔡宇杰; 廖祥儒^*

来源：食品与生物技术学报, 2023, 42(06): 57-66.

• 角蛋白酶
• 克隆表达
• 酶学性质
• 羽毛粉
• 贝莱斯芽孢杆菌

为了获得更好的羽毛粉降解酶，作者从贝莱斯芽孢杆菌基因组中筛选到一个角蛋白酶基因(baker1)，对其克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达，最后对重组角蛋白酶(BaKer1)进行分离纯化、表征及应用研究。结果表明，BaKer1的最适反应pH为9.5，最适反应温度为55℃，在中温和碱性条件下具有较好的稳定性。1 mmol/L Ca2+对BaKer1有显著促进作用，5 mmol/L Mn2+对BaKer1有轻微抑制作用，其他金属离子对BaKer1影响不大。PMSF对BaKer1的活性具有显著抑制作用，表明BaKer1是典型的丝氨酸蛋白酶。分别以羽毛粉、偶氮酪蛋白、酪蛋白为底物测定了BaKer1的动力学参数，Km值分别为5.06、1.09、1.39 mmol/L,kcat/Km值分别为1 058.24、2 536.54、3 733.79 s·mmol/L。BaKer1处理羽毛粉，能达到酸水解效果的33.51%，说明它在羽毛粉降解过程中具有潜在的应用价值。

• 单位
  生物工程学院; 江南大学