Notch1信号调控调节性T细胞在川崎病中的作用

作者：郭育鑫; 杨莉; 王国兵^*; 温鹏强; 齐中香; **国; 刘琮; 李成荣

来源：中华风湿病学杂志, 2022, 26(10).

• 黏膜皮肤淋巴结综合征
• 受体, Notch1
• T淋巴细胞, 调节性
• 叉头转录因子类

目的探讨Notch1信号对川崎病患儿调节性T细胞(Treg)的影响及在血管损伤机制中的作用。方法以2019年3月至2021年6月收治的42例川崎病患儿为研究对象, 分别于急性期及输注丙种球蛋白(IVIG)治疗后取样送检, 对照组为32名同年龄健康儿童。采用流式细胞术检测外周静脉血CD4+CD25hiFoxp3+ Treg数量及叉头螺旋翼状转录因子(Foxp3)、细胞毒性T细胞相关抗原4(CTLA4)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、Notch1蛋白表达水平;免疫共沉淀-定量PCR技术鉴定CD4+ T细胞Foxp3基因启动子组蛋白H4乙酰化(H4Ac)及Notch1受体胞内结合域1(NICD1)、重组信号结合蛋白J(RBP-J)、p300结合水平;荧光定量PCR分析早老素1(PSEN1)、主导控制样蛋白1(MAML1)、RBP-J和Foxp3 mRNA表达;ELISA检测血浆中IL-10、TGF-β蛋白浓度。采用t检验、Pearson相关分析法进行统计分析。结果①与健康对照组相比, 急性期川崎病患儿CD4+CD25hiFoxp3+ Treg比例显著降低[(4.3±1.5)%和(7.9±2.9)%;t=6.41, P<0.001], 分化及功能相关分子(Foxp3、CTLA4、GITR)表达水平和血浆IL-10、TGF-β蛋白浓度明显下降(t=6.87, P<0.001;t=4.26, P<0.001;t=7.88, P<0.001;t=8.42, P<0.001;t=13.01, P<0.001), 其中合并冠状动脉损伤组(CAL)前述6项指标低于无冠状动脉损伤组(NCAL)[t=5.83, P<0.001;t=3.83, P<0.001;t=3.28, P=0.002;t=5.05, P<0.001;t=5.96, P<0.001;t=5.17, P<0.001], 治疗后显著上调[t=7.13, P<0.001;t=6.10, P<0.001;t=4.31, P<0.001;t=6.55, P<0.001;t=7.40, P<0.001;t=7.84, P<0.001]。②急性期川崎病患儿Foxp3基因启动子H4Ac修饰及NICD1、p300结合水平明显低于同年龄对照组(t=10.25, P<0.001;t=6.93, P<0.001;t=6.75, P<0.001), 其中CAL组Foxp3基因启动子H4Ac及NICD1、p300结合水平低于NCAL组(t=6.08, P<0.001;t=2.66, P=0.011;t=6.02, P<0.001), 治疗后明显上调(t=7.72, P<0.001;t=4.16, P<0.001;t=5.76, P<0.001)。Pearson相关分析显示Foxp3基因启动子H4Ac与其mRNA水平呈正相关(r=0.47, P<0.001)。各组间Foxp3/RBP-J结合水平略有改变, 但差异无统计学意义(t=0.57, P>0.005;t=0.61, P>0.05;t=1.20, P>0.05)。③急性期川崎病患儿CD4+ T细胞表面Notch1受体蛋白及下游信号分子PSEN1、MAML1及RBP-J表达水平显著下调[t=5.28, P<0.001;t=6.31, P<0.001;t=11.78, P<0.001;t=8.06, P<0.001], 且CAL组前4项指标均低于NCAL组[t=3.16, P=0.003;t=4.13, P<0.001;t=5.42, P<0.001;t=4.05, P<0.001], 治疗后呈不同程度回调(t=4.77, P<0.001;t=6.43, P<0.001;t=11.95, P<0.001;t=7.79, P<0.001)。经体外重组人Jagged1蛋白刺激48 h后, 川崎病患儿及对照组CD4+ T细胞Foxp3基因H4Ac及NICD1、p300结合水平明显高于未处理组[(川崎病:t=15.36, P<0.001;t=7.25, P<0.001;t=14.29, P<0.001), (对照组:t=7.87, P<0.001;t=5.71, P<0.001;t=8.74, P<0.001)], RBP-J结合水平差异无统计学意义(川崎病:t=1.11, P>0.05;对照组:t=1.37, P>0.05), 但川崎病患儿Foxp3基因H4Ac及NICD1、p300结合水平仍低于对照组(t=3.86, P<0.001;t=3.42, P=0.001;t=2.85, P=0.006)。④经川崎病血清刺激健康儿童外周血PBMCs建立炎症细胞模型, IVIG干预组Treg比例、Foxp3表达水平及CD4+ T细胞Notch1、RBP-J表达水平明显高于未处理组(t=7.10, P<0.001;t=10.16, P<0.001;t=8.06, P<0.001;t=9.77, P<0.001), Foxp3基因启动子H4Ac及NICD1结合水平亦高于后者(t=7.24, P<0.001;t=8.24, P<0.001)。结论 Notch1信号低下所致Treg数量不足及功能障碍可能是导致川崎病患儿免疫功能异常活化及血管损伤的重要因素之一。

• 单位
  广东省深圳市儿童医院