本发明公开了一种比率可任意调节的比率荧光检测方法,利用的是双激发上转换材料,其在两种不同激发光的激发下会产生相互独立、互不干扰的两种发射,以这两波长处的荧光强度比值作为信号参量来检测目标物。在本发明的检测方法中,两发射波长的荧光比率可任意调节,在降低检测信号强度的同时,仍可保留高强度的参比信号,因此可以同时降低检测限并保证参比的准确性,极大提高检测方法的综合适用性。