戊型肝炎病毒一步法多重荧光定量PCR分型鉴定技术的建立及应用

作者：李爱云; 帅江冰^*; 曾若雪; 孙涛; 鱼海琼; 朱道中; 朱宇宁; 张晓峰; 李肖梁

来源：中国预防兽医学报, 2018, 40(11): 1020-1025.

DOI：10.3969/j.issn.1008-0589.201804050

• 戊型肝炎病毒
• 基因型
• 荧光定量PCR
• 多重

为建立鉴别检测戊型肝炎病毒(HEV)各基因型的方法,本研究基于HEV1、HEV3和HEV4的基因组序列,设计一对保守扩增引物和3条型特异性探针,通过体系优化,建立了用于鉴别检测不同型HEV感染的多重荧光定量PCR方法,并以绿色荧光蛋白(EGFP)为内部质控,确保整个诊断流程的准确和有效。特异性试验结果显示该方法仅对HEV扩增为阳性,而对甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、疱疹病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒等核酸扩增均为阴性,特异性好。敏感性试验结果显示,该方法对HEV 1、HEV3和HEV 4的最低检测限均为50个基因组拷贝/反应,敏感性高。分析表明一步法多重荧光定量PCR对不同浓度的HEV 1、HEV3和HEV4重复性试验的变异系数均小于4%,表明该方法具有良好的检测重复性和稳定性。对采集自浙江、安徽、江西、上海和福建省等地区的猪粪便、猪血清和人血清等临床样品进行检测,其结果与传统套式PCR及测序的鉴定结果一致,表明该多重荧光定量PCR对于临床样品的检测具有高准确性,可用于临床HEV隐性感染或早期感染的快速检测。本研究为该病的有效治疗奠定基础。

• 单位
  中华人民共和国山东出入境检验检疫局; 浙江省检验检疫科学技术研究院; 浙江大学医学院附属妇产科医院; 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心; 浙江大学