热力学因素对绵羊重组朊蛋白体外构象转化的作用

作者：王伊琴; 秦贞奎; 包勇敢; 乔俊文; 赵德明

来源：中国农业大学学报, 2009, (04): 21-27.

• 绵羊重组朊蛋白
• 原核表达
• 构象转化
• 圆二色谱
• 热力学因素 recombinant ovine prion protein
• prokaryotic expression
• conformational change
• circular dichroism spectra
• thermal denaturation

构建了绵羊朊蛋白的原核表达载体,获得了高纯度的融合表达蛋白。并在热力学因素的作用下,研究了重组绵羊朊蛋白的构象转化。以基因型为ARQ/ARQ蒙古绵羊的血液DNA为模板,利用DNA重组技术,将绵羊朊蛋白正常成熟蛋白基因OvPrP插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL2l(DE3)中高效表达,获得的表达产物以包涵体形式存在,并对其进行纯化和复性。超滤浓缩后浓度约为0.5 mg/mL的OvPrP97-234,进行热力学处理,利用远紫外线圆二色谱(CD)分析热力学处理前、后蛋白的二级结构的变化,同时,对热力学处理前、后的蛋白进行了蛋白酶K抗性的检测,并对其高级结构进行了预测。结果表明:获得的表达产物...

• 单位
  中国检验检疫科学研究院; 二连浩特出入境检验检疫局; 中国农业大学