莱菔硫烷下调miR-200c启动子甲基化水平抑制肺腺癌干细胞的干性特征

作者：梁广霞; 覃喜团; 谢维; 谢有科^*

来源：肿瘤防治研究, 2021, 48(10): 934-940.

• 莱菔硫烷
• miR-200c
• 肺癌干细胞
• 甲基化

目的探讨莱菔硫烷(SFN)对肺癌干细胞增殖与自我更新的影响及其调控机制。方法 MTT法检测SFN对肺腺癌细胞株H460和A549细胞增殖的影响;肿瘤球形成实验、蛋白印迹法等检测SFN处理前后肺腺癌细胞肿瘤球形成能力、干性相关基因(如β-catenin、Klf4、c-myc)表达水平等;NGS测序法分析SFN对肿瘤细胞miRNAs表达谱的影响;qRT-PCR验证SFN对重点miRNAs转录水平的改变;蛋白印迹法检测SFN对肿瘤细胞DNA甲基化转移酶(DNMTs)表达的影响;构建miR-200c启动子-GFP质粒,细胞免疫荧光、甲基化PCR法和DNA测序法检测SFN对肿瘤球和miRNA启动子甲基化水平的影响。结果 SFN(5.0 μmol/L)处理肺腺癌细胞肿瘤球后miRNAs表达谱发生显著变化,其中miRNA-200c增高最为明显。与对照组比较,SFN-S组H460和A549细胞β-catenin、Klf4、c-myc和Vimentin等蛋白表达下降,DNMT1和DNMT3a蛋白表达水平也明显降低。与对照组比较,SFN-S组稳定表达pEGFP-R200c质粒的H460和A549细胞肿瘤球直径显著减少,而肿瘤球荧光强度增加,GFP蛋白表达上调。上述表达pEGFP-R200c质粒细胞株中miR-200c启动子区域存在9个CpG丰富区域位点,其甲基化水平在对照组、SFN-S组和5-Aza-dC组分别为88.9%、44.4%、38.8%。结论 SFN可能经由表观遗传学水平下调miR-200c启动子甲基化水平,促进miR-200c的转录,从而调控肺癌干细胞的干性相关基因表达。

• 单位
  广西中医药大学附属瑞康医院