细胞内氯通道4基因siRNA表达载体的构建及其沉默效应

作者：袁兆新; 康劲松; 孔晓霞; 张宏宇; 李洪岩; 郑花; 张勇; 苏静; 孙连坤

来源：中国实验诊断学, 2009, 13(02): 146-149.

DOI：10.3969/j.issn.1007-4287.2009.02.002

• 短链干涉RNA
• RNA干涉
• 细胞内氯通道4
• 神经胶质瘤

目的构建针对细胞内氯通道4(CLIC4)的短链干涉RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对CLIC4基因的干涉作用。方法设计CLIC4靶向的发夹状siRNA,据此设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接到pSilencer3.1-H1载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体转染法转染大鼠神经胶质瘤细胞C6,通过RT-PCR检测CLIC4基因表达水平的变化。结果酶切鉴定与DNA测序分析证明CLIC4基因的siRNA载体构建正确,RT-PCR结果表明CLIC4基因的表达水平明显降低。结论成功地构建了针对CLIC4基因的siRNA载体,转染细胞后可显著抑制CLIC4基因表达。

• 单位
  吉林大学; 长春医学高等专科学校; 基础医学院