幽门螺杆菌hpaA核酸疫苗的构建及免疫原性检测

作者：徐灿; 李兆申; 屠振兴; 许国铭; 杜奕奇; 孙波; 杨骅; 龚燕芳; 金晶; 吴红玉

来源：中华消化杂志, 2004, (10): 6-9.

• 幽门螺杆菌
• 疫苗
• 载体

目的构建含幽门螺杆菌(Hp)hpaA基因的核酸疫苗。方法抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA,应用聚合酶链式反应(PCR)技术从基因组DNA扩增hpaA基因,克隆入pUCmT载体,检测hpaA基因序列,经过一系列酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入大肠杆菌,筛选阳性克隆,通过PCR和酶切反应鉴定。通过脂质体法将构建好的重组载体pIREShpaA转染COS7细胞,SDSPAGE及Western印迹法检测pIREShpaA表达HpaA蛋白的免疫原性。结果成功扩增出长约750bp的hpaA基因,测序结果表明扩增出的hpaA基因与HphpaA序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实hpaA基因克隆入真核表达载体pIRES,成功构建了含hpaA基因的Hp核酸疫苗pIREShpaA,并经Western印迹法检测到特异性蛋白条带。结论构建了hpaA基因的Hp核酸疫苗,为进一步探索其免疫作用奠定了基础。

• 单位
  长海医院; 中国人民解放军第二军医大学