腺相关病毒在不同年龄小鼠耳蜗中表达的研究

作者：陈蓓^*; 汤文学; 王建军; 林曦

来源：中华耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2019, (10).

• 基因疗法
• 腺相关病毒
• 耳蜗
• 小鼠,近交C57BL

目的 观察腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)血清型9(AAV9)在不同年龄小鼠耳蜗中的感染和表达情况。方法 将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的AAV9通过圆窗注射或中阶注射两种途径分别导入不同年龄组小鼠的内耳,根据年龄和注射部位分为4组(每组6只)：P1SM组,出生后1天(P1)小鼠经中阶注射；P1RW组,出生后1天(P1)小鼠经圆窗注射；P9RW组：出生后9天(P9)小鼠经圆窗注射；P30RW组,成年小鼠(P30)经圆窗注射。4组小鼠注射后1个月行听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试以及耳蜗基底膜铺片观察GFP在内耳中的表达情况(所有小鼠均左耳手术注射AAV9,右耳做为空白自身对照)。采用GraphPad Prism 5统计软件进行数据分析。结果 GFP可特异性表达于耳蜗毛细胞,新生小鼠(P1)两种注射途径均可导致GFP在内、外毛细胞高表达,且注射耳ABR反应阈值与对侧非注射耳相比,差异无统计学意义(P值均>0.05)。P9RW组小鼠耳蜗内毛细胞GFP表达均为阳性,而外毛细胞表达明显下降；P30RW组仅内毛细胞GFP表达阳性,其外毛细胞无阳性表达。P9RW组与P30RW组注射耳ABR反应阈值较对侧耳均明显提高,差异有统计学意义(P值均<0.01)。结论 AAV9转染新生小鼠后可在耳蜗内、外毛细胞中高表达,且对小鼠ABR反应阈无明显影响；成年小鼠内耳转染AAV9后,仅在内毛细胞表达,并造成小鼠ABR反应阈升高。AAV9在新生小鼠耳蜗中的转染效率明显高于成年小鼠。

• 单位
  郑州大学; 郑州大学第一附属医院