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摘要
背景:研究表明,Hoxa10基因受到mi RNA的调节后与成骨分化存在一定的关联性,但有关Hoxa9在成骨分化和胫骨骨折愈合中的表达和功能尚未见报道。目的:初步探讨Hoxa9对体外骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其体内模型的骨折损伤的治疗作用。方法:(1)体外实验:在成骨诱导培养基中培养小鼠骨髓间充质干细胞,分别进行Hoxa9基因被sh Hoxa9沉默或被MSCV-Hoxa9过表达处理;(2)体内实验:构建胫骨骨折模型大鼠,分别用Hoxa9和sh Hoxa9干预。结果与结论:(1)体外实验q RT-PCR及Western blot检测显示,Hoxa9的过表达能够明显抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化(P <0.05),细胞中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的m RNA及蛋白均下调(P <0.05),细胞中钙化结节的数量、成骨分化能力及碱性磷酸酶活性显著降低(P <0.05),而沉默Hoxa9的表达可逆转上述现象;(2)体内实验组织学染色结果表明,经Hoxa9干预的大鼠组织中骨性损伤明显增加,未发现组织间胶原纤维和愈合损伤组织内的软骨,sh Hoxa9干预大鼠显示骨的大小和数量明显增加,检测到组织间胶原纤维和愈合损伤组织内的软骨;(3)体内实验q RT-PCR及Western blot检测发现,Hoxa9干预的大鼠骨折损伤组织中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的m RNA及蛋白均下调(P<0.05);而sh Hoxa9组大鼠骨折损伤组织中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的m RNA及蛋白均上调(P<0.05);(4)上述数据说明,沉默Hoxa9基因可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,进而促进骨折愈合。
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