重组LacZ复制缺陷型腺病毒的构建和鉴定

作者：裘秀春; 许彦鸣; 马保安; 周勇; 单乐群; 杨彤涛; 于翠娟; 孟艳玲; 杨安钢; 范清宇

来源：医学研究生学报, 2006, (11): 963-966+1065.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2006.11.002

• 腺病毒表达载体
• LacZ

目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复制缺陷性,然后感染HeLa细胞X-gal染色检测LacZ的表达情况。结果:成功构建了重组LacZ腺病毒表达载体,包装获得的重组腺病毒的滴度为1.58×109PFU/m l。在转染的细胞和感染的靶细胞内均可检测到LacZ的表达。电镜下可见感染的HEK293细胞核内含晶格状结构的腺病毒包函体。斑点杂交提示重组病毒为复制缺陷型,其基因转移百分率和感染强度和感染时间有一定的相关性。结论:成功构建了表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。

• 单位
  第四军医大学