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摘要
目的探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)抑制剂FK866对脓毒症小鼠肝损伤的治疗效果及作用机制。方法按随机数字表法将84只健康雄性C57BL/6J小鼠分为假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿孔术致脓毒症肝损伤模型组(CLP组)、溶剂对照组(Vehicle+CLP组)和FK866干预组(FK866+CLP组),每组21只。FK866+CLP组和Vehicle+CLP组分别于制模前24、12和0.5 h腹腔注射FK866(10mg/kg)或等体积二甲基亚砜。每组15只小鼠用于观察术后48 h存活情况;剩余6只小鼠于术后20 h处死取下腔静脉血和肝组织标本用于指标检测。采用比色法测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清NAMPT、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量,用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织TNF-α、IL-6的mRNA表达,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织NAMPT、胞质核转录因子-κB(NF-κB)抑制因子α(IκBα)和胞核NF-κB的蛋白表达。结果与Sham组比较,CLP组小鼠48 h存活率显著下降,血清和肝脏NAMPT蛋白水平显著升高,血清ALT、AST、TNF-α、IL-6水平和肝组织TNF-α、IL-6的mRNA表达明显升高,胞质IκBα蛋白表达明显下降,胞核NF-κB蛋白表达明显升高,说明CLP可以诱导NF-κB活化和炎症反应及导致肝损伤。Vehicle+CLP组与CLP组各指标比较差异均无统计学意义。与Vehicle+CLP组比较,FK866+CLP组小鼠48 h存活率显著提高(53.33%比26.67%),血清ALT、AST、TNF-α、IL-6水平和肝组织TNF-α、IL-6 mRNA表达显著降低[血ALT(U/L):128.94±32.48比237.24±58.61,血AST(U/L):289.89±68.74比468.00±82.17,血TNF-α(pg/L):65.17±18.74比127.64±48.18,血IL-6(ng/L):31.78±5.23比60.87±13.12,肝TNF-αmRNA(2-ΔΔCt:8.37±4.17比18.24±6.12,肝IL-6 mRNA(2-ΔΔCt):18.58±7.12比34.24±6.71〕,胞质IκBα蛋白表达明显升高(IκBα/GAPDH:0.23±0.03比0.12±0.04),胞核NF-κB蛋白表达显著下降(NF-κB/Lamin B1:0.25±0.04比0.42±0.05),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 NAMPT抑制剂FK866可能通过抑制NF-κB活化,减轻炎症反应,进而对脓毒症肝损伤小鼠肝组织起到保护作用。
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单位华中科技大学同济医学院附属同济医院; 中国人民解放军广州军区武汉总医院
