H2O2对人皮肤成纤维细胞衰老标记蛋白30及自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达的影响

作者：田黎明; 彭圆; 胡荣毅; 程杨; 姜红浩; 陈红英; 田庆均; 张翀; 王平^*

来源：中华皮肤科杂志, 2017, 50(12): 899-903.

• 皮肤衰老
• 过氧化氢
• 成纤维细胞
• 自噬
• 衰老标记蛋白30
• LC3Ⅱ

目的探讨H2O2对人皮肤成纤维细胞(NHSF)衰老标记蛋白30(SMP30)以及细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型(LC3Ⅱ)的影响。方法用150 μmol/L H2O2处理2～4代NHSF 2 h, 构建细胞衰老模型作为H2O2组, 而未处理的NHSF作为对照组。细胞衰老β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测衰老细胞比例, 间接免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3的表达, 反转录PCR(RT-PCR)检测SMP30 mRNA的表达, Western印迹法检测SMP30和LC3蛋白的表达。结果 H2O2组NHSF的SA-β-gal染色阳性率(41.70% ± 2.95%)显著高于对照组(3.03% ± 0.25%, t = 22.59, P < 0.05)。间接免疫荧光结果显示, H2O2组NHSF LC3阳性率(12.60% ± 1.57%)明显低于对照组(23.67% ± 3.04%, t = 5.61, P < 0.05)。Western印迹显示, H2O2组LC3Ⅰ/GAPDH比值(0.40 ± 0.02)与对照组(0.41 ± 0.04)比较差异无统计学意义(P > 0.05), 而H2O2组LC3Ⅱ/GAPDH比值(0.20 ± 0.02)明显低于对照组(0.80 ± 0.03, t = 29.69, P < 0.05), 且H2O2组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(0.51 ± 0.03)亦明显低于对照组(1.98 ± 0.23, t = 10.967, P < 0.05)。H2O2组SMP30 mRNA和蛋白水平(与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.16 ± 0.01和0.27 ± 0.02)明显低于对照组(分别为0.35 ± 0.01和0.63 ± 0.02), 均P < 0.05。结论 H2O2可降低NHSF中SMP30及LC3Ⅱ的表达水平, 加速NHSF衰老。

• 单位
  基础医学院; 湖北中医药大学; 武汉市中西医结合医院; 华中科技大学; 武汉市第一医院