泛素连接酶SMURF1催化ADAR1的多聚泛素化修饰

作者：周文淼; 王红霞; 刘昆梅; 刘菁; 屈昱良^*; 郭乐^*

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2023, 39(11): 1630-1637.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2023.09.1219

• SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1
• RNA腺苷脱氨酶1
• 泛素化
• 翻译后修饰

既往研究发现，SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)通过其E3泛素连接酶活性介导自噬进程，然而SMURF1的泛素化底物蛋白质仍有待进一步挖掘。本文利用免疫共沉淀(Co-IP)联合蛋白质谱分析捕获并鉴定THP-1细胞中SMURF1的相互作用蛋白质集合物，发现在THP-1细胞中SMURF1可与222种蛋白质物理性结合，RNA腺苷脱氨酶1(adenosine deaminase acting on RNA 1,ADAR1)具有较高的肽段结合分数。构建SMURF1过表达载体并转染到HEK-293T细胞中，Co-IP和Western印迹检测验证外源性SMURF1与内源性ADAR1存在相互作用。qRT-PCR和Western印迹检测结果显示，在HEK-293T细胞中过表达SMURF1后ADAR1 mRNA水平差异无统计学意义、蛋白质水平明显降低(P<0.05)。用放线菌酮(CHX)分别处理正常和过表达SMURF1的HEK-293T细胞，Western印迹检测显示，过表达SMURF1后ADAR1的半衰期缩短(P<0.05)。进一步在HEK-293T细胞中共转染泛素(Ub)过表达载体和SMURF1过表达载体，通过Co-IP和Western印迹检测结果证实，过表达SMURF1后ADAR1的多聚泛素化水平显著增加(P<0.05)。在蛋白酶体抑制剂(MG132)作用后，Western印迹检测结果表明，蛋白酶体降解途径受抑制后SMURF1对ADAR1的负调控作用减弱(P<0.05)。本研究表明，SMURF1可以与ADAR1相互作用，催化ADAR1的多聚泛素化修饰并介导其蛋白酶体途径降解，为探索SMURF1通过影响ADAR1蛋白质稳定性而具备的多种生物学功能提供理论基础。

• 单位
  宁夏医科大学