重组鸭γ-干扰素抗血清制备

作者：王永娟; 郭艳丽; 吴植; 王安平; 郭长明; 吴双; 洪伟鸣; 秦枫; 朱善元^*

来源：扬州大学学报（农业与生命科学版）, 2019, 40(05): 61-69.

DOI：10.16872/j.cnki.1671-4652.2019.05.010

• 鸭
• γ-干扰素
• 原核表达
• 抗体

参照大肠埃希菌密码子的偏好性,对GenBank中发布的鸭γ-干扰素基因序列进行密码子优化,人工合成后连接至原核表达载体pET-30a-ELP;将重组表达质粒pET-30a-DuIFNγ-ELP转化到大肠埃希菌BL21 (DE3)中, IPTG诱导表达制备DuIFNγ-ELP;通过SDS-PAGE切胶方法得到纯化的DuIFNγ-ELP;纯化产物免疫小鼠后收获血清,用Western blot验证免疫血清的特异性,并用ELISA法检测其特异性抗体滴度。结果表明:重组鸭γ-干扰素基因能成功表达,重组蛋白大小约为78 ku;纯化的目的蛋白纯度约为90%,能诱导小鼠产生特异性抗体,效价为1∶15 000。这一研究为研制广谱、安全、高效的基因工程鸭γ-干扰素及检测体内外DuIFN-γ的表达奠定了基础。

• 单位
  生命科学学院; 南京师范大学; 江苏农牧科技职业学院; 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室