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摘要
将人工合成的CSFV Erns基因插入到pFastBac1获得重组转移载体pFastBac1-Erns,在DH10Bac大肠杆菌中转座后提取杆粒并转染Sf9细胞,用获得的重组杆状病毒感染High Five细胞表达Erns蛋白并通过亲和层析进行纯化。以纯化后Erns蛋白作为诊断抗原,通过摸索抗原包被量和抗体血清稀释倍数等条件,建立检测CSFV Erns抗体的间接ELISA方法(Erns-iELISA)。结果显示,Erns蛋白得到有效表达,相对分子质量约为35 000;确定的ELISA抗原包被量为120 ng/孔、血清稀释100倍,酶标二抗稀释6 000倍,封闭条件为37℃30 min,TMB底物作用15 min,临界值为0.329。用Erns-iELISA方法检测92份阴性血清,其特异性为88.04%,与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸系统综合征病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应;对171份阳性血清的敏感性为92.98%;批内和批间重复的平均变异系数为7.4%和10.74%。结果表明,本试验所建立的Erns-iELISA方法重复性好,具有较高的检测特异性,且对CSFV疫苗毒和国内流行毒株都具有较高的检测敏感性,具有潜在的开发和应用价值。
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