MicroRNA-150通过靶向作用于RUNX2基因抑制骨肉瘤细胞系增殖

作者：王龙飞; 王卫国; 李劲松; 陈世杰; 詹瑞森

来源：中南大学学报(医学版), 2016, 41(12): 1285-1290.

• miR-150
• 骨肉瘤
• RUNX2

目的:研究人骨肉瘤细胞系(Saos-2,MG-63)中microRNA-150(miR-150)表达水平及其对细胞增殖的作用,并探讨其分子生物学作用机制。方法:采用相对实时定量PCR检测人骨肉瘤细胞系Saos-2,MG-63和正常成骨细胞系NHOst中miR-150表达差异。采用慢病毒转染过表达miR-150,实时定量PCR检测过表达组miR-150水平。细胞增殖实验采用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法。Western印迹检测Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)及内参β-actin蛋白水平。双荧光素酶反应检测miR-150与RUNX2 3'-UTR结合对上游基因表达抑制率。结果:MiR-150在Saos-2和MG-63细胞系中表达低于正常成骨细胞系NHOst,分别为0.23±0.02,0.32±0.03和1.00±0.02,差异具有统计学意义(P<0.01)。Saos-2细胞系空载体对照组和miR-150过表达组分别为1.00±0.08和4.17±0.19,差异具有统计学意义(P<0.01),MG-63细胞系空载体对照组和miR-150过表达组分别为1.00±0.07和3.43±0.10,差异具有统计学意义(P<0.01)。过表达miR-150后,Saos-2和MG-63细胞增殖率明显下降(P<0.01),RUNX2蛋白量明显降低(P<0.01)。Saos-2细胞系中,miR-150结合RUNX2 3'-UTR区抑制69%上游荧光素酶活性(P<0.05);MG-63细胞系中,miR-150抑制59%上游荧光素酶活性(P<0.05)。在过表达miR-150的Saos-2和MG-63细胞中,补充外源性RUNX2蛋白,可恢复骨肉瘤细胞的增殖水平(P<0.01)。结论:MiR-150具有抑制骨肉瘤细胞增殖的作用,直接结合RUNX2 3'-UTR抑制转录因子RUNX2合成是其重要的作用机制。

• 单位
  天津市天津医院; 中南大学湘雅三医院