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摘要
【目的】筛选对松褐天牛成虫具有高致病力的白僵菌菌株,以期用于防治松褐天牛成虫。【方法】收集被病原真菌感染的松褐天牛幼虫,25℃条件下PDA培养基培养分离纯化病原真菌。使用25℃、相对湿度60%、光周期16 L∶8D条件下羽化5～10天的健壮松褐天牛成虫,生物测定病原真菌致死效果。将PDA培养基上培养获得的病原真菌孢子,分别溶于0.05%的吐温80溶液中,配制成终浓度分别为1×106～3×106或者1×106～3×107个·mL-1的孢子悬浮液,0.05%的吐温80溶液作为空白对照。采用涂枝法和喷洒法处理松褐天牛成虫,以累计校正死亡率为指标评价菌株的致病力。折线图由R包"ggplot2"绘制。采用ITS1和ITS4扩增真菌保守序列,经连接转化后测序。采用软件muscle比对序列,MEGA软件中的最大似然法构建系统发育树。【结果】从感染的23头松褐天牛幼虫中共分离出23株白僵菌菌株,通过喷洒法初步筛选出18天累计校正死亡率在30%以上的6个菌株。选取B7和B92个产孢量大(14天,108·cm-2)的菌株,涂枝法进行毒力测试结果表明,B9菌株在12天的累计校正死亡率即可达到100%,而B7菌株在12天时的累计校正死亡率约为50%±10%,B9菌株的致死速率显著高于B7菌株。ITS扩增及测序结果表明与球孢白僵菌的同源性为99%。系统发育树结果也表明B9菌株与球孢白僵菌聚为同一分支上。结合形态、NCBI Blast比对结果和系统发育树共同确定B9菌株为球孢白僵菌。【结论】本研究得到对松褐天牛成虫高毒力的球孢白僵菌菌株,对于防治松褐天牛具有良好的应用前景,但实际应用价值需要进一步的田间试验进行确认。
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单位北京市植物园; 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所; 中国林业科学研究院华北林业实验中心
