TRIM32通过Akt/GSK3β/CREB信号通路对甲基苯丙胺成瘾的调控作用

作者：孟宪勇; 张晗; 孙晓静; 余会娇; 董晓华^*

来源：毒理学杂志, 2023, 37(05): 383-390.

DOI：10.16421/j.cnki.1002-3127.2023.05.012

• TRIM32
• 甲基苯丙胺
• 成瘾
• Akt/GSK3β/CREB信号通路
• 条件性位置性偏爱

目的 观察TRIM32在甲基苯丙胺(methamphetamine, MA)成瘾过程中的作用，探讨其可能的作用机制。方法 小鼠分4组：野生型小鼠(WT)+生理盐水(NS)、WT+MA、Trim32-/-+NS和Trim32-/-+MA组。观察WT和Trim32-/-小鼠自发活动，条件位置性偏爱实验观察Trim32基因缺失对MA成瘾性的形成、消退和复燃的影响，分离各组小鼠纹状体提取蛋白，Western blot检测Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β、CREB和p-CREB的表达水平。培养PC12细胞，采用MTT法，筛选出MA最适给药浓度，体外细胞实验分4组：潜剂对照组(NC)+NS、NC+MA、siTRIM32+NS和siTRIM32+MA,采用siRNA转染技术干扰Trim32的转录，空载作对照，各组给与MA或NS后24 h,收细胞提蛋白，Western blot法检测各组中Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β、CREB和p-CREB的表达。结果 WT和Trim32-/-小鼠自发活动未见明显差别(P>0.05)。条件位置性偏爱实验结果显示，与给予NS相比，WT和Trim32-/-小鼠给予MA时偏爱评分明显增加(WT:P<0.01,Trim32-/-:P<0.05),与WT+MA相比，Trim32-/-+MA的偏爱评分明显减少(P<0.01)。WT和Trim32-/-小鼠在MA成瘾后第28天，偏爱评分都降至给药前水平，与对照组比较无明显差别(P>0.05),当再次给予一次MA后，WT+MA偏爱评分(110±13)与WT+NS评分(22±9)相比，明显升高(P<0.05),Trim32-/-+MA评分(40±10)与Trim32-/-+NS(27±7)相比无明显差异(P>0.05),同时WT+MA评分(110±13)和Trim32-/-+MA(40±10)两组小鼠的偏爱评分差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠纹状体Western blot结果显示，与WT+NS比，WT+MA中TRIM32表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.01);各组间Akt、GSK3β和CREB蛋白水平无明显变化；同给予NS相比，WT小鼠在给予MA时，p-Akt和p-GSK3β蛋白表达明显下降(P<0.01),p-CREB蛋白表达明显上调(P<0.05);与WT+MA相比，Trim32-/-+MA小鼠p-Akt和p-GSK3β蛋白表达明显上调(p-Akt:P<0.05,p-GSK3β:P<0.01),p-CREB蛋白表达明显下降(P<0.05)。MTT实验筛选PC12细胞MA最适剂量为800μmol/L,建立成瘾模型。细胞Western blot结果与小鼠纹状体结果一致。结论 Trim32基因缺失小鼠对MA不易成瘾和复燃，其机制可能与激活Akt/GSK3β/CREB信号通路有关。

• 单位
  河北北方学院附属第一医院