MDCC-MSB1细胞酵母双杂交cDNA表达文库的构建与鉴定

作者：崔鹏鹏; 高宏雷; 李凯; 高立; 高玉龙; 祁小乐; 王笑梅

来源：中国畜牧兽医, 2013, (05): 22-25.

• MDCC-MSB1细胞
• cDNA文库
• 鸡传染性贫血
• 酵母双杂交 MDCC-MSB1 cell lines
• cDNA library
• chicken infectious anemia
• yeast two-hybrid

提取生长状态良好的MDCC-MSB1细胞的mRNA,以5′端标记有生物素的Oligo dT primer为引物反转录,合成双链后连接Adapter。分级纯化后,通过BP重组反应构建入门文库,滴度为1×105 CFU/mL,文库总容量为1.1×106 CFU,平均插入片段长度为1190bp,阳性重组率为100%。入门文库扩增后提取质粒,通过LR重组反应转化为表达文库,平均滴度为1×105 CFU/mL,文库总容量为1.2×106 CFU,平均插入片段长度为1087bp,重组率为100%。构建的表达文库具有较高的质量,为研究鸡传染性贫血病毒的受体及其细胞嗜性奠定了基础。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所