磷酸二酯酶9A在心肌细胞缺血缺氧再灌注损伤的表达变化及意义

作者：申健; 李梦豪; 李幼奇; 邓焕堂; 张宇; 罗艳芳; 农盛雄; 谢雄伟; 刘锦光^*

来源：医学研究生学报, 2022, 35(03): 250-256.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2022.03.005

• 心肌梗死
• 缺血缺氧再灌注损伤
• 凋亡
• 磷酸二酯酶9A
• 环磷酸鸟苷

目的 磷酸二酯酶9A(PDE9A)在缺血缺氧再灌注中的作用尚不明确。文中旨在探讨PDE9A对缺血缺氧再灌注所致乳鼠心肌细胞的作用。方法 培养原代乳鼠的心肌细胞鉴定后，采用氧糖剥夺/再灌注法(OGD/R)构建心肌细胞缺氧的模型；磷酸二酯酶9A (PDE9A)的干扰质粒转染入OGD/R细胞，并向细胞中分别加入可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)和受体型鸟苷酸环化酶(rGC)的抑制剂处理。实验分为对照组(心肌细胞不干预)、OGD/R组(构建心肌OGD/R模型)、siPDE9A组(构建PDE9A的干扰质粒转染OGD/R细胞)、sGC组(正常细胞加入sGC抑制剂)、sGC+siPDE9A组(PDE9A的干扰质粒转染OGD/R细胞，并加sGC抑制剂)、sGC+rGC+siPDE9A组(sGC抑制剂+rGC抑制剂+siPDE9A)。采用Western blot检测PDE9A和环磷酸鸟苷(cGMP)的表达，流式细胞术检测细胞凋亡水平。向OGD/R的心肌细胞中加入PDE9的抑制剂BAY 73-6691,并按不同时间分为30 min组、60 min组、120 min组，180 min组及240 min组，采用CCK-8观察细胞活性，流式水平检测细胞凋亡情况和ATP检测细胞线粒体活性，采用Western blot检测PDE9A和cGMP及其下游相关蛋白的级联变化。结果 OGD/R组PDE9A表达量(1.00±0.21)显著高于对照组(2.13±0.26),差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较，转染siPDE9至大鼠心肌细胞时，siPDE9A组的PDE9A蛋白被显著抑制(P<0.001)。与对照组比较，OGD/R组cGMP蛋白表达显著抑制，PDE9A蛋白表达显著增加(P<0.001);与OGD/R组比较，sGC组的cGMP蛋白表达显著抑制，siPDE9A组、siPDE9A+sGC组、 siPDE9A+sGC+rGC组的PDE9A蛋白表达显著抑制(P<0.001),cGMP蛋白表达显著增加(P<0.001)。流式细胞检测结果提示，与OGD/R组比较，对照组、siPDE9A组、siPDE9A+sGC组细胞凋亡率显著抑制(P<0.05)。CCK-8检测结果表明，对照组、60 min组、120 min组、180 min组、240 min组细胞增殖较OGD/R组显著上升(P<0.05)。流式细胞检测结果表明，对照组、60 min组、120 min组、180 min组的细胞凋亡率较OGD/R组显著抑制(P<0.05)。ATP检测结果表明，对照组、60 min组、120 min组、180 min组的ATP含量较OGD/R组显著上升(P<0.05)。结论 PDE9A参与心肌细胞缺血缺氧再灌注损伤，抑制PDE9A能降低因缺血缺氧再灌注损伤所致的细胞凋亡，且该作用机制可能与抑制cGMP水平有关，并且避开了NO信号通路。

• 单位
  惠州市中心人民医院