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摘要
目的探究转化生长因子-β1(TGF-β1)对人呼吸道平滑肌(HASM)细胞增殖、迁移的影响。方法采集于空军军医大学第一附属医院行肺叶切除术的2例哮喘患者的肺叶标本并获取HASM细胞。将处于对数生长期的HASM细胞随机分为空白组、低剂量TGF-β1组、中剂量TGF-β1组和高剂量TGF-β1组,低剂量TGF-β1组、中剂量TGF-β1组和高剂量TGF-β1组细胞分别应用终质量浓度为0.1、1.0、10.0μg·L-1TGF-β1进行处理,空白组细胞应用等量磷酸盐缓冲液处理。另将HASM细胞随机分为对照组、阴性对照组、微RNA-21(miR-21) inhibitor组和TGF-β1+miR-21inhibitor组。对照组细胞不作任何处理,阴性对照组细胞转染阴性对照载体,miR-21 inhibitor组细胞转染miR-21inhibitor,TGF-β1+miR-21 inhibitor组细胞转染miR-21 inhibitor后以10μg·L-1TGF-β1处理48 h。应用细胞计数试剂盒-8和划痕实验分别检测各组细胞增殖和迁移情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测空白组、低剂量TGF-β1组、中剂量TGF-β1组、高剂量TGF-β1组细胞miR-21相对表达量,采用蛋白免疫印迹法检测对照组、高剂量TGF-β1组、miR-21 inhibitor组、TGF-β1+miR-21 inhibitor组细胞第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源等位基因(PTEN)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白相对表达量。结果各组细胞铺板培养至12、24、48 h时,低剂量TGF-β1组、中剂量TGF-β1组、高剂量TGF-β1组细胞增殖能力显著高于空白组(P <0.05),中剂量TGF-β1组、高剂量TGF-β1组细胞增殖能力显著高于低剂量TGF-β1组(P <0.05),高剂量TGF-β1组细胞增殖能力显著高于中剂量TGF-β1组(P <0.05); miR-21 inhibitor组细胞增殖能力显著低于阴性对照组和对照组(P <0.05),TGF-β1+miR-21inhibitor组细胞增殖能力显著高于miR-21 inhibitor组(P <0.05)。细胞划痕培养48 h后,低剂量TGF-β1组、中剂量TGF-β1组、高剂量TGF-β1组细胞划痕愈合率显著高于空白组(P <0.05),中剂量TGF-β1组、高剂量TGF-β1组细胞划痕愈合率显著高于低剂量TGF-β1组(P <0.05),高剂量TGF-β1组细胞划痕愈合率显著高于中剂量TGF-β1组(P <0.05); miR-21 inhibitor组细胞划痕愈合率显著低于对照组和阴性对照组(P <0.05),TGF-β1+miR-21 inhibitor组细胞划痕愈合率显著高于miR-21 inhibitor组(P <0.05)。低剂量TGF-β1组、中剂量TGF-β1组、高剂量TGF-β1组细胞中miR-21相对表达量显著高于空白组(P <0.05);中剂量TGF-β1组、高剂量TGF-β1组细胞中miR-21相对表达量显著高于低剂量TGF-β1组(P <0.05);高剂量TGF-β1组细胞中miR-21相对相对表达量显著高于中剂量TGF-β1组(P <0.05)。与对照组比较,高剂量TGF-β1组细胞PTEN相对表达量降低,p-Akt/Akt水平提高(P <0.05)。与对照组比较,miR-21 inhibitor组细胞PTEN相对表达量升高,p-Akt/Akt水平下降(P <0.05)。与miR-21 inhibitor组比较,TGF-β1+miR-21 inhibitor组PTEN相对表达量降低,p-Akt/Akt水平升高(P <0.05)。结论 TGF-β1可促进HASM细胞的增殖和迁移,且呈剂量依赖性,其作用机制可能与上调miR-21表达及激活PTEN/Akt信号通路有关。
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