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摘要
目的 通过气-液界面（ALI）培养技术将人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549与内皮细胞共培养，探究内皮细胞存在条件下A549细胞表型和功能的变化。方法 基于transwell培养体系建立气液共培养模型，A549细胞接种于transwell膜上表面，内皮细胞接种于transwell膜下表面，实时定量PCR(RT-qPCR)检测A549细胞经过传统ALI培养和ALI与内皮细胞共培养后的肺表面活性蛋白、细胞间连接以及与新冠病毒入侵细胞相关分子的表达，流式细胞术检测新冠病毒S蛋白截短体重组慢病毒的细胞感染率。结果 通过比较分析，发现EA.hy926内皮细胞系较原代内皮细胞HUVEC更加适合建立新型ALI共培养模型。A549细胞经过传统ALI培养后肺表面活性蛋白SP-B、SP-D的表达上调，促进上皮钙黏蛋白E、紧密连接蛋白表达，新冠病毒受体神经紧张素1、去唾液酸糖蛋白受体1、含kringle跨膜蛋白1显著上调；而在ALI与内皮细胞共培养体系中，上述基因的上调更加显著（P<0.05），模型病毒粒子感染率较传统ALI培养的A549细胞显著上升（P<0.05）。结论 成功构建A549细胞和EA.hy926内皮细胞共培养模型，为相关肺部疾病病理研究和药物筛选提供了新的研究模型。
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