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摘要
AP2/ERF家族转录因子在植物生长发育、逆境反应和次生代谢产物的合成等过程中有着重要的作用。为了探究喜树转录因子的功能，本研究在克隆喜树中转录因子CaERF1的基础上，对CaERF1进行异源表达及其蛋白纯化。构建重组蛋白表达载体pET28a-CaERF1，分析该蛋白在大肠杆菌Rosetta （DE3）和BL21两种宿主中的表达情况；然后利用Ni-NTA纯化目标蛋白，最终确定表达与纯化条件。研究结果表明成功构建原核表达质粒pET28a-CaERF1，经IPTG诱导后实现CaERF1在大肠杆菌中的异源表达，发现在37℃，IPTG终浓度为1.0 mmol/L时其诱导表达效果较优；破碎菌体后，分析全菌、破碎上清以及沉淀中蛋白含量，结果显示蛋白主要分布在破碎上清中，表明该蛋白表达能够以可溶形式存在；表达产物通过Ni-NTA层析柱进行纯化，在100 mmol/L浓度咪唑下可以获得分子量大小为21.8 kDa目的蛋白CaERF1。本研究为进一步研究该转录因子在体外的功能，乃至揭示喜树碱积累的调控机制提供一定的基础。
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单位大连工业大学; 生物工程学院
