胰岛素生长因子结合蛋白-2 siRNA表达载体的构建及鉴定

作者：许淑芬; 王英凯; 刘磊; 孙牧男; 马寅芙; 方艳秋; 谭岩

来源：中国老年学杂志, 2014, 34(19): 5507-5509.

• 胰岛素生长因子结合蛋白-2
• RNA干扰
• 脑胶质瘤细胞

目的构建针对胰岛素生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,研究载体介导的RNAi技术对人U251脑胶质瘤细胞株中IGFBP-2表达的抑制作用。方法根据GenBank提供的IGFBP-2基因(NM-000597)核苷酸序列及siRNA的设计原则,设计合成4对带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,筛选得到576594 nt、908926 nt、938956 nt 3个19 bp片段靶序列,同时随机组合出一条无关序列,应用限制性内切酶酶切和测序技术鉴定重组克隆。用脂质体介导转染人U251胶质瘤细胞株,采用RT-PCR和Western印迹方法检测细胞IGFBP-2 mRNA和蛋白表达。结果酶切筛选得到4个目的片段的阳性克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RT-PCR和Western印迹检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低U251细胞中IGFBP-2 mRNA和蛋白表达水平。结论成功构建载体介导的IGFBP-2靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制U251细胞中IGFBP-2基因的表达。

• 单位
  吉林大学第一医院; 吉林省人民医院; 中心实验室